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小鼠虹膜色素上皮细胞

简要描述：产物可保小鼠虹膜色素上皮细胞的生长状态。本产物中已包含小鼠虹膜色素上皮细胞生长所需的各种成分，无需添加任何成分，可直接用于小鼠虹膜色素上皮细胞的体外培养。本产物仅供进一步科研使用，不得用于诊断、治疗、临床、家庭及其它用途。

产物型号：GOY-01X1060
厂商性质：科研
更新时间：2023-10-24 00:00:00
访&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;问&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;量：246

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?原代细胞培养实验注意事项详解

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小鼠虹膜色素上皮细胞

产物名称：小鼠虹膜色素上皮细胞

货号：GOY-01X1060

分类：原代细胞

2.组织来源：眼球

3.产物规格：5×105cells/T25细胞培养瓶

4.细胞介绍：小鼠虹膜色素上皮细胞分离自眼球虹膜组织；虹膜是眼睛构造的一部分，属于眼球中层，位于血管膜的前部；在睫状体前方虹膜，中心有一圆形开口，称为瞳孔，犹如相机当中可调整大小的光圈，内含色素决定眼睛的颜色。日间光线较为强烈时，虹膜会收蹜，只使一小束光线穿透瞳孔，进入眼睛；当进入黑暗环境中，虹膜就会往后退缩，使瞳孔变大，让更多的光线进入眼睛，多数的脊椎动物的眼睛都有虹膜。虹膜色素上皮细胞（IPE）是虹膜重要结构组成细胞之一，位于虹膜组织的后面，和视网膜色素上皮细胞（RPE）同样起源于神经外胚叶层，可能具有相似的生物学功能，因此对IPE的研究将为防治因RPE结构或功能异常而导致的眼底病提供新思路。

5.方法介绍：公司实验室分离的小鼠虹膜色素上皮细胞采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

6.质量检测：公司实验室分离的小鼠虹膜色素上皮细胞经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

7.培养信息：包被条件鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等换液频率每2-3天换液一次生长特性贴壁细胞形态上皮细胞样传代特性可传1-2代培养条件气相：空气，95%；CO2，5%

培养操作：

小鼠虹膜色素上皮细胞1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入 4mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆脱落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

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