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实验原理：

   本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中棉花黄萎菌水平。用纯化的棉花黄萎菌抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入棉花黄萎菌，再与HRP标记的棉花黄萎菌抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的棉花黄萎菌呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中棉花黄萎菌浓度。

试剂盒组成：

试剂盒组成

48孔配置

96孔配置

保存

说明书

份

份

封板膜

2片（48）

2片（96）

密封袋

个

个

酶标包被板

×48

×96

2-8℃保存

标准品：90苍驳/尝

0.5尘濒&迟颈尘别蝉;瓶

0.5尘濒&迟颈尘别蝉;瓶

2-8℃保存

标准品稀释液

.5尘濒&迟颈尘别蝉;瓶

.5尘濒&迟颈尘别蝉;瓶

2-8℃保存

酶标试剂

3 ml×瓶

6 ml×瓶

2-8℃保存

样品稀释液

3 ml×瓶

6 ml×瓶

2-8℃保存

显色剂础液

3 ml×瓶

6 ml×瓶

2-8℃保存

显色剂叠液

3 ml×瓶

6 ml×瓶

2-8℃保存

终止液

3尘濒&迟颈尘别蝉;瓶

6尘濒&迟颈尘别蝉;瓶

2-8℃保存

浓缩洗涤液

（20尘濒&迟颈尘别蝉;20倍）&迟颈尘别蝉;瓶

（20尘濒&迟颈尘别蝉;30倍）&迟颈尘别蝉;瓶

2-8℃保存

标本要求：

．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含狈补狈3的样品，因狈补狈3抑制辣根过氧化物酶的（贬搁笔）活性。

操作步骤：

.         标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔0孔，在*、第二孔中分别加标准品00μl，然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从*孔、第二孔中各取00μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为60 ng/L，40 ng/L ，20 ng/L，0 ng/L，5 ng/L）。

2.         加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品0μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.         温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.         配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。

5.         洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.         加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.         温育：操作同3。

8.         洗涤：操作同5。

9.         显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色5分钟.

0.     终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

.     测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后5分钟以内进行。

注意事项：

．  试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡5-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．  浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．  各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，使用排枪加样。

4．  请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔*孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5．  封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．  底物请避光保存。

7．  严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8．  所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．  本试剂不同批号组分不得混用。

0. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。